파트 4. 종양 세포 억제 및 가능한 메커니즘에 대한 극도로 저주파 전자기장의 영향

info-1437-249

트립신 (최적의 소화 시간은 세포마다 다릅니다 : 293 T, 1 분; HEPG2, 1 분; A549, 2 분) . 소화

배지에서 종결되고 모든 세포가 원심 분리 튜브 .에 첨가 된 다음 구멍을 청소했습니다.

정상적인 식염수를 여러 번, 원심 분리 튜브 .에 첨가하면,이 시점에서 원심 분리 튜브에는 모든 세포가 포함되어 있습니다 ..

구멍에 세포가 남아 있는지 여부는 현미경 .에서 관찰되었습니다.

현탁 된 세포 : 모든 세포 현탁액을 원심 분리 튜브에 넣었습니다 . 구멍을 정상으로 세척했습니다.

식염수를 여러 번, 원심 분리 튜브 .에 넣은이 시점에서 원심 분리 튜브에는 모든 세포가 포함되어 있습니다 .

현미경 하에서 세포 잔기에 대해 기공이 관찰되었다 ..

계수 : 세포를 원심 분리하고, 적절한 배지에 재현 탁시키고, 부분적으로 희석하고, 염색했습니다.

Trypan Blue .을 사용하면 커버 글래스 .를 통해 10 ㎕가 주입되었습니다.

계산 공식 : 세포 수/4 × 부피 × 희석 비율 × 104 .

각 그룹의 세포는 총 3 개의 그룹에 대해 3 회 계산되었습니다 .

pH 값 감지 .막-투과성 형광 염료 BCECF AM 및 pH- 민감성 플루오르

Cent Probe 2 ', 7'-Bis- ({2- Carboxyethyl) -5- Carboxyfluorescein (Beyotime Biotechnology, China)을 사용하여 평가했습니다.

세포 내 pH 값 . 세포는 96- 웰 플레이트에서 배양하고 5- mt, 20- Hz 자기장에 노출되었습니다.

첫 2 일에 2 시간 동안 . 3 일째에, 세포를 0.04% 플루로 닉에서 100 ㎕의 25 µm BCECF AM에 재현 탁시켰다.

F -127 작업 용액은 37 ± 0 . 18도에서 CO2 인큐베이터에서 1 시간 동안 인큐베이션했습니다. 상청액이 교체되었습니다

HHBS 완충액 (미국 AAT Bioquest)을 사용하여 세포는 2 h .에 대한 자기장 노출에 적용되었습니다.

이어서 상청액을 PBS로 교체하고, FITC 유세포 분석법 (FACS)을 사용하여 pH 값을 결정 하였다.

Calibur, Bd) .

세포 내 칼슘 농도 분석 .막-투과성 형광 염료 calbryte

520 AM (Aat BioQuest)을 사용하여 세포 내 칼슘 농도 . 세포를 배양 하였다.

96- 웰 플레이트를하고 처음 2 일 동안 2 시간 동안 5- mt, 20- Hz 자기장에 노출되어 . 3 일째에 세포는

0.04% Pluronic F -127 작업 솔루션에서 100 µl의 5 µm Calbryte 520 AM에 재현 탁시키고

CO2 인큐베이터 37 ± 0 . 18도 1 시간. 상청액은 HHBS 버퍼 (AAT BioQuest)로 대체되었으며

세포를 자기장에 2 시간 동안 노출시켰다.

Lular Calcium 농도 값은 FITC 유세포 분석법 (FACS Calibur) .을 사용하여 결정되었습니다.

세포의 막 전위 결정 .막 전위는

잠재적 인 민감성 형광 염료 비스-(1, 3- dibitylbarbituric acid) Trimethine Oxonol (DIBAC4) (3) (aat bio

퀘스트) . 형광 염료 DIBAC4 (3)가 높은 막 전위를 갖는 탈분극 세포에 스며 들었다.

세포 내 형광 강도의 증가로 이어지는 . DIBAC4 (3)은 하이퍼 포로 배출되었다.

larized 세포 및 세포 내 형광 강도는 . 감소했습니다. 세포는 96- 웰 플레이트에서 배양되었습니다.

5- mt, 20- Hz 자기장에 처음 2 일 동안 2 시간 동안 .에 노출되었습니다. . 세포는 100 ㎕의 HHBS .에서 배양되었습니다.

3 일째에, 세포를 100 ㎕의 10 μM DIBAC4 (3) 오전 0.04% 플루 로닉 F -127 작업 솔루로 재현 탁시켰다.

1 시간 동안 37 ± 0 . 18도에서 CO2 인큐베이터에서 배양하고 배양 하였다. 상청액을 HHBS 버퍼로 교체 하였다

(aat bioquest), 세포는 2 h .에 대한 자기장에 노출 된 다음 상청액을 대체했습니다.

PBS 및 세포막 전위는 FITC 유세포 분석법 (FACS Calibur) .을 사용하여 결정되었다.

나트륨 이온 검출 .세포는 96- 웰 플레이트에서 배양하고 5- mt, 20- Hz 자기에 노출되었습니다.

처음 2 일에 2 시간 동안 . 3 일째에 배지를 100 ㎕의 HHBS 및 100 ㎕의 10 µm로 대체 하였다.

0 {. 04% Pluronic F -127 작업 솔루션의 SBFI AM (Cayman Chemical). 상청액이 교체되었습니다

4- h 인큐베이션 후 37 ± 0.18도에서 HHBS 완충액 (AAT Bioquest)을 노출시키고 세포를 노출시켰다.

2 h .에 대한 자기장에 나트륨 이온은 330/80 여기 및 528/20 방출로 결정되었다.

마이크로 플레이트 테스터 .

칼륨 이온 감지 .세포는 96- 웰 플레이트에서 배양하고 5- mt, 20- hz mag에 노출되었습니다.

처음 2 일에 2 시간 동안의 Netic 장 . 3 일째에 배지를 100 ㎕의 HHB 및 100 ㎕의로 교체 하였다.

0 . 04% Pluronic F -127 작업 솔루션의 10 µm PBFI AM (Cayman Chemical). 4- h 이후 CO2에서 인큐베이션 한 후

인큐베이터 37 ± 0.18도에서 상청액을 HHBS 완충액 (AAT BioQuest)으로 대체하고 세포는

2 h .에 대한 자기장에 노출 된 칼륨 이온 측정은 330/80 여기에서 수행되었으며

528/20 마이크로 플레이트 테스터를 사용한 방출 .

Trypan Blue Dyeing .로그 성장 단계에서 293 T, HEPG2 및 A549 세포를 트립신을 소화시켰다.

수확 된 . 라지 세포는 원심 분리 후 직접 .을 수집 하였다.

염료 trypan blue . 살아있는 세포는 거꾸로 된 광학 현미경 (Carl Zeiss, Germany) . 셀로 계산되었습니다.

성장 억제 속도가 결정되었고, 대표적인 곡선은 . 억제율 (%)=(Num

자기장 그룹에서 세포의 대조군 - 내부에서 세포의 BER) / 대조군의 세포 수

그룹 × 100%.

통계 분석 .모든 데이터는 평균의 평균 ± 표준 오차 및 일방 통화 분석으로 표현되었습니다.

분산은 여러 그룹 . 간의 비교에 사용되었습니다. 학생 T 테스트는 처리 된 것을 비교하는 데 사용되었습니다.

처리되지 않은 그룹 . ap 값<0.05 indicated a statistically significant difference. The confirmatory results

p<0.05 were obtained from repeating studies at least two times. Each set of experiments had three parallel

샘플과 각 실험은 세 번 반복되었습니다 .

데이터 가용성

모든 데이터는이 게시 된 기사 및 보충 파일 .에 표시됩니다.

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감사의 말

기술 지원 . .에 대해 Peter K . 법률에 감사드립니다.

저자 기여

j . s . 연구를 설계하고, 대부분의 실험을 수행하고, 데이터를 분석하고, 원고를 작성하고 . h . w .을 썼습니다.

실험 설계에 조언하고 실험 . y . j ., x . J ., y . c and y . y . t.}}}}}}

수행 된 실험 . w .} y . j .는 원고 . z . m, k . c, x . d.}}}}}}}}}}}}}}}} z . l . c 및 j . m . w 입자

자기장 기기의 생산 및 측정에서 . g . h . y ..

연구, 해석 데이터 및 원고 .을 썼습니다.

자금

상하이 과학 및 기술 개발 팬의 암 예방 및 치료를위한 특별 기금

Dation (Grant Number CT20200517a) .

경쟁 관심사

저자는 경쟁 관심사를 선언하지 않습니다 .

추가 정보

보충 정보온라인 버전에는 https : // doi . org/에 제공되는 보충 자료가 포함되어 있습니다.

10.1038/s41598-023-34144-5.

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